是指在履行试验进程中，避免全部微生物侵入机体和坚持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技能和管理办法。

　　（2）在操作和培育进程中避免全部其它微生物的侵入的办法。包含紫外线灭菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作东西、器皿灭菌、操作办法等。

　　（1）在履行无菌操作时，有必要清晰物品的无菌区和非无菌区，接种时有必要穿作业服、戴作业帽，应在进无菌室前用番笕洗手，然后用75%酒精棉球将手擦洁净；

　　（2）在操作前20～30分钟要先发动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培育基等有必要经消毒灭菌，翻开包装未运用完的器皿，不能放置后再运用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点着炙烤3次后运用。禁止用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而有必要用消毒的钳、镊子等；

　　（3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及显露部位，运用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；

　　（4）接种样品、转种细菌有必要在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及翻开试管塞都要通过火焰消毒；

　　（6）吸管汲取菌液或样品时，运用相应的橡皮头汲取，不得直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，而且在敞开和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

　　①无菌室内应坚持清洁，作业后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦作业台面，不得寄存与试验无关的物品；

　　②无菌室运用前后应将门关紧，翻开紫外线，如选用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，间隔在1.0m处，照耀时刻不少于30min，运用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作，避免引起损害，灯管每隔两周需用酒精棉球悄悄拭擦，除掉上面尘埃和油垢，以削减紫外线穿透的影响；

　　③处理和接种食物标本时，进入无菌室操作，不得随意收支，如需求传递物品，可通过小窗传递。在无菌室内如需求设备空调时，则应有过滤设备。

　　（3）无菌间一般只允许放置无菌操作台、转椅等物品；无菌操作台上一般只允许摆放以下物品：酒精灯、打火机、接种针、消毒棉球、洗耳球、镊子、油性笔、灭菌平皿、试管架、灭菌吸管、电子天平、250mL灭菌三角瓶、培育基、均质器等。

　　培育基经高压灭菌后，用通过灭菌的东西（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌资料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培育基上，这个进程叫做无菌接种操作。

　　在试验室中，用得最多的接种东西是接种环、接种针。有时滴管、吸管也可作为接种东西进行液体接种。在固体培育基外表要将菌液均匀涂布时，需求用到涂布棒。

　　①取一菌种管和培育基管，置左手食指、中指、无名指间，拇指压住两管底部上旁边面，使菌种管坐落外侧，培育基管坐落内侧；

　　③以右手小指与手掌，小指与无名指别离夹取棉塞（先外管后内管），将两管口敏捷通过火焰1~2次；

　　④将已灭菌的接种环伸入菌种管中，从斜面上取菌少量，敏捷伸入待接种的培育基管中，在斜面底部向上齐截条直线，然后从底部起向上作弯曲接连划线，直至斜面上方顶端；

　　⑥做好标识，置35℃培育箱中培育18~24小时。斜面培育一般构成均匀共同的菌苔。一般可调查外表、通明度、色泽等特征。

　　涂布法接种是一种常用的接种办法，不只能够用于核算活菌数，还能够使用其在平板外表成长构成菌苔的特色用于检测化学要素对微生物的抑杀效应。

　　原理：将必定浓度，必定量的待别离菌液移到已凝结的培育基平板上，再用涂布棒快速地将其均匀涂布，使长出单菌落而到达别离的意图。

　　②灭菌接种环，从菌种管取菌，伸入培育基管中，在挨近液面的管壁上方悄悄研磨，并沾取少量培育基液体谐和，使细菌混合于培育基的液体中。液体培育基一般以18~24小时培育后调查成长特征。

　　②以灭菌接种针从菌种管取菌，笔直刺入培育基的中心（半固体或一般琼脂高层）直达近管底部（但不能彻底刺到管底），接种针应沿原路退出；

　　③经培育后半固体培育基可调查到：沿穿刺线成长，线外的培育基清亮表明细菌无动力；穿刺线模糊不清，或沿穿刺线向外分散成长，或整个培育基混浊表明细菌有动力。

　　（2）纯培育：如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培育（Pure culture）；

　　（3）别离纯化：在进行菌种鉴守时，所用的微生物一般均要求为纯的培育物，得到纯培育的进程称为别离纯化。包含倾泻平板法、涂布平板法、平板划线、倾泻平板法（倒平板）

　　将无菌培育皿放入生物安全柜或净化台中，然后别离倒入15ml已消融而且冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培育基，加盖后悄悄摇摆培育皿，使培育基均匀分布，待凝结之后，把这平板倒置在恒温培育箱中培育。单一细胞通过屡次增殖后构成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述过程数次，便可得到纯培育物。整个操作进程应严厉依照无菌操作。

　　微生物的成长，除了受自身的遗传特性决议外，还遭到许多外界要素的影响，如养分物浓度、温度、水分、氧气、pＨ等。微生物的品种不同，培育的方法和条件也不尽相同。一般分为：

　　因为微生物细胞含有很多水分，机体是无色通明的，与周围布景没有显着的反差， 有必要进行染色，使经染色后的菌体与布景构成显着的色差，从而能更清楚地调查到其形状和结构。

　　用两种或多种染料染细菌，意图是为了辨别不同性质的细菌，所以又名辨别染色法。首要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。

　　④斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色停止，大约需时20-30s，随即水洗；

　　⑥用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜调查，发现意图物后用油镜调查，留意细菌细胞的色彩。